Procedimiento para una prueba de esterilidad
¿Cuál es el procedimiento para realizar una prueba de esterilidad? ¿Cómo se interpretan los resultados de la prueba de esterilidad?
Subject: Prueba de esterilidad
La prueba de esterilidad tiene fundamento en la detección de formas viables de microorganismos, en medios de cultivo adecuados para el crecimiento de bacterias, hongos y levaduras, que se encuentran como contaminantes en productos estériles.
Procedimiento de una prueba de esterilidad
Certificación de las propiedades nutritivas de los medios de cultivo
A una muestra representativa de cada medio estéril, inocular 1mL de una suspensión que contenga de 10 a 100 UFC/mL de cada una de las cepas de microorganismos que se mencionan en la tabla 1. Corroborar la cantidad de microorganismos inoculados realizando una cuenta viable en placa. La prueba es satisfactoria si, durante el periodo de incubación de 7 días, a la temperatura indicada se presenta crecimiento evidente del microorganismo. Esta prueba puede realizarse simultáneamente con la prueba de esterilidad del medio de cultivo, incubando una cantidad representativa de envases conteniendo el medio durante 7 días a las temperaturas indicadas en la tabla 1.
Determinación de inhibidores microbianos
Antes de realizar por primera vez la prueba de esterilidad a un producto, determinar la presencia de inhibidores microbianos en el mismo. Cuando se utilice el método directo, el procedimiento es el siguiente: preparar suspensiones de microorganismos que contengan de 10 a 100 UFC/ml a partir de un cultivo de 24 horas de las cepas de los microorganismos mencionados en la tabla 1. Inocular con 1ml de cada una de las suspensiones preparadas a los tubos conteniendo el medio de cultivo. Adicionar el producto en prueba a la mitad de los tubos con medio inoculado. Incubar los tubos a la temperatura apropiada durante al menos siete días.
Tabla 1. Cepas de microorganismos
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Medio
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Microorganismo
de prueba |
Temperatura
de incubación |
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A-B
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Bacillus subtilis
Micrococcus luteus |
30 a 35°C
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C-D
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Bacteriodes vulgatus
Clostridium sporogenes Stapylococcus aureus |
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E-F
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Bacillus subtilis
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20 a 25°C
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G-H
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Candida albicans
Staphylococcus aureus |
Tabla 2. Selección de número de muestras
Para líquidos (mL)
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Contenido en cada envase del producto
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Cantidad mínima tomada por envase para cada medio de cultivo
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Volumen mínimo de cada medio
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Número de envases por medio de cultivo
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Para cada envase de prueba
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Para la membrana completa
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Menos de 10
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1mL o todo el volumen si contiene menos de 1mL
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15
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100
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20 (40 si cada envase no contiene volumen para ambos medios)
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De 10 a menos de 50
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5mL
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40
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100
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20
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De 10 a menos de 100
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10mL
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80
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100
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20
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De 50 a menos de 100 para administración intravenosa
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Todo el contenido del envase
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---
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100
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10
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De 100 a 500
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Todo el contenido del envase
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---
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100
|
10
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Más de 500
|
500mL
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---
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100
|
10
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Para sólidos (mL)
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Contenido en cada envase del producto
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Cantidad mínima tomada por envase para cada medio de cultivo
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Volumen mínimo de cada medio
|
Número de envases por medio de cultivo
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Para cada envese de prueba
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Para la membrana completa
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Menos de 50
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Todo el contenido del envase
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15
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100
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20
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De 50 a menos de 200
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La mitad del contenido del envase
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40
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100
|
20
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Más de 200
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100mg
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40
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100
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20
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Algodón absorbente o material esterilizado
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1g a 10cm2
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40 a 80
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---
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20
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Compresas, gasas y suturas
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unidad
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40 a 80
|
---
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20
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Interpretación de resultados
Examinar los tubos en la prueba a los tiempos establecidos. Si no se observa turbiedad o crecimiento debidos a desarrollo microbiano, el producto cumple con los requisitos de la prueba de esterilidad. Si se observa crecimiento microbiano, pero hay evidencia de contaminación accidental o los tubos testigo se encuentran contaminados, la prueba es descartada y debe repetirse con el mismo número de muestras.
Si se observa crecimiento o turbiedad debido a crecimiento microbiano y los tubos testigo pasan la prueba, realizar tinción de Gram para observar morfología microscópica y repetir la prueba con el doble de muestras, utilizando las mismas condiciones que la primera prueba. Si no se observa crecimiento microbiano al término del periodo de incubación de la segunda prueba, pero se demuestra que se utilizó una técnica inadecuada, la segunda prueba se invalida y se repite. Si se observa crecimiento microbiano y la técnica empleada fue satisfactoria, se realiza tinción de Gram y si la morfología microscópica es la misma que en la primer prueba, el producto no cumple con la prueba de esterilidad.
La prueba de esterilidades es muy importante para la liberación de un lote de producto terminado, para la cual la esterilización de los medios es el paso más importante. ICLAB, S.A. de C.V. cuenta con personal capacitado para poder brindar servicio de validación a autoclaves y diferentes equipos de laboratorio.
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