Los procesos de centrifugado: la centrifugación zonal
¿Qué es el coeficiente de sedimentacion? ¿Qué tipos de sedimentación existen?
Subject: Los procesos de centrifugado
La centrifugación zonal
La muestra a analizar se deposita en la parte superior de un gradiente de densidad preformado. Bajo fuerza centrífuga las partículas comenzarán a sedimentar a través del gradiente, moviéndose cada partícula a diferentes velocidades dependiendo de su masa. La migración depende de el tamaño y forma de las partículas, la fuerza centrífuga aplicada y la densidad y viscosidad del medio. La propiedad física sobre la que se fundamenta la separación es la masa de las partículas y no su densidad. A diferencia de lo que ocurre en la centrifugación isopícnica, la densidad máxima del gradiente no debe exceder la de las partículas a separar. Los gradientes de densidad impiden que las bandas de cada componente se ensanchen por efecto de corrientes convectivas y se mezclen durante la aceleración y desaceleración del rotor. Frecuentemente se usan con este propósito gradientes de sacarosa más densos en el fondo que en la parte superior del tubo, otros medios usados con este fin son: glicerol, Ficoll, Percoll. En general se usan rotores de tipo swing-out. Las muestras son centrifugadas lo suficiente como para separar las moléculas de interés; si la centrifugación se prolonga en el tiempo, las partículas se recuperan en el pellet, como se muestra en el siguiente gráfico:
Diagrama de representación de la velocidad de la centrifugación zonal e isopicnica
ρ1: Densidad boyante de partículas de menos densidad
ρ2: Densidad boyante de partículas de más densidad
Con la finalidad de obtener separaciones adecuadas de los componentes de las mezclas es necesario que la velocidad y el tiempo de centrifugado sea el adecuado para lo cual el equipo en el cual se llevará a cabo el proceso deberá estar debidamente calibrado en cuanto a revoluciones por minuto y a tiempo de centrifugado, para lo cual, Instrumentos Científicos y de Laboratorio (ICLAB), cuenta con personal calificado para verificar y calibrar este tipo de equipos.
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